Calibraciones de espectrofotómetros UV-Visible

Disponemos de 3 tipos de calibración:

CALIBRACIÓN ESTÁNDAR

Calibración recomendada para empresas y laboratorios que utilizan el espectrofotómetro de forma cotidiana en el rango UV–Visible de 200–800 nm.

• Determinación de la exactitud de la longitud de onda en 5 puntos (si el equipo lo permite): 279 nm, 361 nm, 453 nm, 536 nm y 637 nm.
• Determinación de la exactitud de la escala fotométrica:

Rango UV: 235 nm, 257 nm, 313 nm y 350 nm.
Rango visible: 440 nm, 465 nm, 546.1 nm, 590 nm y 635 nm.

• Determinación de la luz difusa a 340 nm y 370 nm.
• Determinación de la repetibilidad de las lecturas de absorbancia

CALIBRACIÓN PREMIUM

Recomendada para empresas y laboratorios que requieren una mayor densidad de puntos o puntos específicos dentro del rango UV–Visible de 200–800 nm.

• Determinación de la exactitud de la longitud de onda en 5 puntos (si el equipo lo permite): 279 nm, 361 nm, 453 nm, 536 nm y 637 nm.
• Determinación de la exactitud de la escala fotométrica (absorbancia/transmitancia) en 12 puntos:

Rango UV: 235 nm, 257 nm, 313 nm y 350 nm.
Rango visible: 8 puntos a elegir entre 420 nm y 900 nm. (En caso de no indicarse los puntos de calibración, el laboratorio calibrará en: 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750 y 800 nm)

• Determinación de la luz difusa a 340 nm y 370 nm.
• Determinación de la repetibilidad de las lecturas de absorbancia.

CALIBRACIÓN TÉCNICA A MEDIDA

Calibración recomendada para laboratorios con protocolos propios o equipos con requisitos especiales.

• Determinación de la exactitud de la longitud de onda, desde 250 nm hasta 2000 nm (si el equipo lo permite).
• Determinación de la exactitud de la escala fotométrica (absorbancia/transmitancia) en todos los puntos requeridos por el cliente en el rango de 200–2500 nm. (En caso de no indicarse los puntos, el laboratorio calibrará todo el rango del equipo cada 50 nm)
• Determinación de la luz difusa a 340 nm y 370 nm.
• Determinación de la repetibilidad de las lecturas de longitud de onda y absorbancia.

Los espectrofotómetros UV-visible permiten evaluar la luz que es absorbida, transmitida o reflejada por un material –ya sea en estado sólido o líquido- para cada longitud de onda.

La transmitancia es la fracción o porcentaje de luz incidente que atraviesa una muestra para unas longitudes de onda dadas. Mediante la medida de la transmitancia es posible saber si un material transmite o no el UV, la transparencia en el visible, el color –en materiales translúcidos-, etc.

La absorbancia –también denominada densidad óptica de transmitancia o densidad óptica (DO)- es la cantidad de luz que absorbe un material. Esta magnitud está relacionada logarítmicamente con la transmitancia. La absorbancia se emplea habitualmente para establecer una relación, mediante la Ley de Lambert-Beer, con la concentración de algún tipo de analito que se quiera estudiar.

Las medidas de estas magnitudes se realizan a través de los espectrofotómetros. Estos equipos disponen principalmente de 3 componentes: el sistema de iluminación, el monocromador y el detector.

Sistema de iluminación

El sistema puede estar compuesto por diferentes fuentes de iluminación. Con frecuencia los espectrofotómetros disponen de una fuente de hidrógeno o deuterio para la zona del espectro ultravioleta y una de tungsteno para la zona del espectro visible y NIR. Las fuentes, que marcan el rango espectral del equipo, pueden ir de 200nm a 2500nm. Los espectrofotómetros UV-Visible cubren normalmente un rango de longitudes de onda de 200nm a 900nm, que incluye zona ultravioleta, visible y  de infrarrojo cercano.

Monocromador

Este componente permite separar el espectro de iluminación y proporcionar, con ello, un haz de energía a una longitud de onda concreta. De esta manera, es posible realizar tareas que requieran una separación precisa de longitudes de onda diferentes. Así por ejemplo, si se trabaja con distintos compuestos químicos que presentan una absorbancia característica a 340nm, interesa que el monocromador separe de forma precisa esta longitud de onda del resto, por tanto, habría que asegurarse de que el equipo trabaja a 340nm y no a 342nm.

La calibración en longitud de onda es la que se realiza a esta parte del equipo, especialmente cuando la longitud de onda es crítica o afecta a las medidas que se realizan. Este tipo de calibración comprueba la diferencia entre la longitud de onda que mide el equipo y la longitud de onda del patrón de referencia empleado. Es posible calibrar diferentes puntos de longitud de onda en todo el rango del equipo, desde los 200nm hasta los 2500nm.

Detector y registrador

El detector se encarga de transformar la señal que recibe (fotones) y convertirla en señal eléctrica, de tal manera que, en función de la intensidad de ésta, pueda quedar registrada por un sistema que proporciona los valores numéricos de transmitancia y absorbancia o DO.

Conocer con exactitud los valores de absorbancia y transmitancia a cada longitud de onda es también un aspecto crítico, pues permite comparar espectros de diferentes materiales o disoluciones con diferentes concentraciones.

La calibración del detector, o escala de absorbancia y transmitancia, permite conocer la desviación del equipo en estos valores. Esto es importante porque, por ejemplo, al medir la absorbancia de un material a 50nm, un equipo podría indicar que para  estos nm el material tiene una absorbancia de 2DO, cuando el valor real podría ser de 2.3DO. Conocer la corrección del equipo en valores de absorbancia es necesario para realizar las medidas.

La calibración en absorbancia se realiza a todas las longitudes de onda necesarias. Para cada longitud de onda se realizan medidas para diferentes valores de absorbancia. Después, se evalúa la diferencia entre el valor medido por el equipo y el valor certificado de los patrones empleados.

La luz difusa es la radiación que puede llegar al detector con una longitud de onda no deseada. Este tipo de radiación puede causar errores importantes de lectura de absorbancia y, con ello, desviaciones de la Ley de Lambert-Beer.

La linealidad de la escala fotométrica consiste en determinar la capacidad del equipo de medir absorbancia en función de la concentración de diferentes disoluciones. La linealidad se puede analizar a través de coeficientes de correlación de la curva de calibrado de absorbancia en función de la concentración.

Eyco está acreditado por ENAC para calibrar en la escala de longitud de onda y en absorbancia o transmitancia. Nuestro laboratorio está capacitado para calibrar tanto equipos portátiles como de sobremesa.

Eyco dispone también de acreditación para calibrar la zona del NIR, desde 780nm a 2500nm. En concreto, nuestro laboratorio es el único en España acreditado para calibrar la zona del NIR desde 900nm a 2500nm.

Campo de medida Range	Incertidumbre (*) Uncertainty (*)	Norma/Procedimiento Uncertainty (*)	Instrumentos a calibrar Instruments	Código Code
TRANSMITANCIA TRANSMITTANCE
(213,235,257,261,313,350) nm 1 ≥ T > 0,3 0,3 ≥ T > 0,1 0,1 ≥ T > 0,01 0,01 ≥ T > 0,001	0,020 0,050 0,20 0,25	PT39 Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros UV-VIS	A, I
200 nm ≤ λ ≤ 420 nm 1 ≥ T > 0,3 0,3 ≥ T > 0,1 0,1 ≥ T > 0,01 0,01 ≥ T > 0,001	0,0090 0,015 0,040 0,15	PT50 Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros UV-VIS	A, I
(420-900)nm 0.00010≤T<0.0010 0.0010≤T<0.10 0.10≤T±1	0.30 0.080 0.0069	PT39 Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros UV-VIS	A, I
DENSIDAD ÓPTICA DE TRANSMITANCIA (ABSORBANCIA) OPTICAL TRANSMITTANCE DENSITY (ABSORBANCE)
(213, 235, 257, 261, 313, 350) nm 0 ≤ A < 0,5 0,5 ≤ A < 1,0 1,0 ≤ A < 2,0 2,0 ≤ A ≤ 2,5	0,0070 0,0080 0,030 0,070	PT39 Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros UV-VIS	A,I
200 nm ≤ λ ≤ 420 nm 0 ≤ A < 0,5 0,5 ≤ A < 1,0 1,0 ≤ A < 2,0 2,0 ≤ A ≤ 2,5	0,0040 0,0060 0,020 0,060	PT50 Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros UV-VIS	A,I
(420-900)nm 0≤A≤1.50 1.50≤A≤3 3≤A≤4	0.0040 0.050 0.20	PT39 Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros UV-VIS	A,I
(900-2500)nm 0≤A≤0.8 0.8≤A≤2	0.0040 0.0090	PT39Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros	A,I
LONGITUD DE ONDA WAVELENGTH
200nm≤λ≤850 nm 850nm≤λ≤2000nm	0.30 nm 0.50nm	PT39 Procedimiento interno basado en: Real Farmacopea Española IUPAC Recommended Reference Materials for realization of Physicochemical properties	Espectrofotómetros UV-VIS	A,I

Una vez su equipo haya sido calibrado por el personal experto de Eyco, recibirá un Certificado de Calibración amparado por la acreditación ENAC. Dicho Certificado recoge la identificación completa de su equipo, el procedimiento que el laboratorio ha seguido para realizar la calibración y el resultado de la misma.

El resultado de la calibración es una corrección junto con su incertidumbre. Esta corrección es la diferencia entre el valor del patrón de referencia y el valor medido por su equipo. En el Certificado de Calibración emitido por Eyco, obtendrá la corrección de la longitud de onda y la absorbancia. Si el cliente lo solicita, se le facilitarán también los valores de luz difusa y linealidad.

A partir de los valores de corrección y su incertidumbre, podrá establecer los valores de aceptación y rechazo del equipo.

Además, junto a su equipo, recibirá una etiqueta de calibración con el número de certificado, la identificación del equipo y la fecha de calibración.